超濾聯用中壓柱層析分離咸鴨蛋清抗氧化肽

【摘要】：為了提高咸鴨蛋清的綜合利用，制備咸鴨蛋清抗氧化肽。首先，以脫鹽咸鴨蛋清粉為原料，以自由基清除能力為指標，篩選出最適蛋白酶并確定水解條件。其次，通過超濾聯用中壓柱層析技術依次對水解粗肽進行分級和純化。最后，鑒定所得活性肽純度及序列。結果表明酸性蛋白酶為最適蛋白酶，其水解最優條件為酶解溫度45 ℃、底物濃度為3%、酶添加量為2×10~(4) U/g、水解時間為6 h。該條件下水解液DPPH自由基清除率達94.23%，水解度達33.52%。水解液經超濾和中壓柱層析得最優組分UF-43，純度達91.97%，其自由基清除能力較未分離的水解液提高約5倍。經高效液相串聯二級質譜（high-performance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）測定，其氨基酸序列為Phe-Gly-Ser-Val，分子質量為408 Da。因此，利用超濾聯用中壓柱層析技術可實現小分子活性肽分級和純化。